実験原理解説

細胞培養でのコンタミの原因と見分け方【画像・動画へのリンクあり】

・培養細胞がコンタミしているかをどうやって確認するの?

・実際のコンタミしたらどうなるか画像や動画で見たい

・コンタミの原因を知りたい

こんにちは。大学で助教をしているHiro(@THiro70217938)といいます。

研究歴は12年、細胞培養歴は9年です。

この記事では、「細胞がコンタミしていないか不安」、「コンタミがおきるとどうなるんだろう」、「実際にコンタミが起きている細胞を見てみたい」といった人向けの記事です。

この記事を読めば、「コンタミが起きた時の変化」がわかり、「コンタミしたときにもすぐに気が付ける」ようになります。

コンタミの原因

まとめ

コンタミの原因になるのは主に、細菌酵母カビウイルスマイコプラズマクロスコンタミネーションクロスコンタミ)です。

この中で細菌・酵母・カビがコンタミすると「顕微鏡で見ると細胞以外のものが存在する」、「培地が濁っている」、「培地のフェノールレッドが黄色になる」といった変化が起き、目視によって確認することができます

ウイルス・マイコプラズマは目視では確認できないため、コンタミさせないようにすることが重要です。

コンタミの原因とコンタミが起きたときの変化

細菌

初心者が経験するコンタミの多くが細菌のコンタミになります。

細菌は大きさが数µmであるため、顕微鏡で確認することができます。

球状・桿状・らせん状など様々なかたちをしていて、小さな粒が動いて見えます

さらに汚染が進むと、培地が濁る培地が黄色くなるといった変化が起き、容易にコンタミの確認ができます。

具体例を以下のリンクで確認してみてください。

動画リンク

YouTubeで視聴したい方はこちら(Moving Bacteria in Cell Culture)

画像リンク

JCRB細胞バンク(リンク先のサイトに画像が複数あります)

酵母

酵母も細菌と同じように大きさが数µmで、顕微鏡を使って確認できます。

かたちは球状で、汚染が重度になると培地が濁る黄色くなるといった変化が起きます。

以下のサイトの丸いものが酵母です。

画像リンク

Eppendorf(リンク先画像の丸いものが酵母)

カビ

カビは細いフィラメント状で、目視により確認できます。

カビの汚染が重度になると、みなさんがよく知っているカビのコロニーが見られるようになり、さらに培地が濁り黄色に変化します。

ウイルス

ウイルスの大きさは数十~数百nmで、通常の顕微鏡では見ることができません。

そのため、ウイルスがコンタミしているかを判断するのは困難です。

ウイルスのコンタミを確認するためには、電顕・免疫染色・ELISA・PCRが必要になります。

マイコプラズマ

マイコプラズマは最も小さい自己増殖可能な微生物です。

大きさは1µm以下で、顕微鏡で観察することはできません

過去の調査では、約20%の細胞にマイコプラズマがコンタミしていると言われています。

マイコプラズマがコンタミすることで、細胞の代謝が変化したり、増殖が遅くなったりします

マイコプラズマのコンタミは、培養法・PCR法・染色法により確認できます。

研究室でもできるマイコプラズマの確認法を以前の記事で紹介しているので、興味がある人はチェックしてみてくださいね。

【PCR法】すぐにできるマイコプラズマの検出方法解説【プロトコル付き】 ・培養細胞の増えが悪くてマイコプラズマがコンタミしているのではないか? ・今すぐにマイコプラズマのコンタミを検出したいけど...

クロスコンタミネーション

クロスコンタミネーションとは、「複数種類の培養細胞が混ざること」を指します。

研究室内では、複数の細胞を培養しているときに、同じ培地や器具を使って細胞が混入することが原因になります。

複数の細胞を扱う場合は、細胞によって培地を使い分ける同時に複数の細胞を使って作業をしないなど、クロスコンタミが起きないように工夫をしましょう。

原因の確認方法と対処方法

細菌・酵母・カビなどがコンタミしていたらどうすればいいのでしょうか。

細胞のストックが余っているのなら、他の細胞へのコンタミの拡大を防ぐためにすぐに処分をしましょう。

また可能でしたら、使用していた試薬を全て新しいものにしインキュベーターを清掃しておきましょう。これによって二次被害を食い止めることができます。

コンタミの原因を確かめたい人は、使っていた試薬をそれぞれ細胞なしでディッシュに入れインキュベーターに入れて様子を観察しましょう。試薬がコンタミしている場合は、微生物の増殖が確認できます。

この確認によって他の細胞が汚染されることもあるので、コンタミがおきたときには先ず研究室の先生や先輩に相談したうえで、対応をしてくださいね。

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